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Wysłany: Wto 18:40, 08 Mar 2011 Temat postu: converse pas cher API法与16SrRNA |
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API法与16SrRNA法鉴定棒状杆菌比较
29)建立实时荧光定量PCR检测新型隐球菌CAP10基因及其初步应用林旎,.一,戴琳孙,程祖建,杨滨一,李雯-一,converse pas cher,陈勇一,江凌,欧启水,,(1.福建医科大学附属第一医院检验科,moncler paris,福建福州350005;2.福建医科大学检验系,福建福卅l350004;3.福建医科大学基因诊断研究室,p90x workout calendar,福建福州350005;4.福建医科大学附属第一医院神经外科,福建福州350005)摘要:目的建立FQ-PCR(rea1.timeFluorescentQuantitativePCR)系统定量检测新型隐球菌CAP10基因,为将其应用于新型隐球菌感染的诊断和疗效判断奠定基础。方法根据新型隐球菌5种血清型(A、B、C、D、AD)中同源序列设计引物和探针,PCR扩增CAPIO基因片段,并将其克隆到pGEM-TEasy载体上,构建质粒标准品;建立FQ―PCR体系,优化反应条件,建立标准曲线,进行特异性、敏感性、重复性实验。结果FQ-PCR系统用于检测CAP10基因片段,敏感性为1拷贝数/,重复性好,批内变异系数(cv)为1.36%,批问变异系数(cV)为1.86%,特异性好,对临床其他常见脑膜炎病原体不出现特异性扩增曲线。结论成功建立了新型隐球菌CAP10基因n~-PCR检测方法,结果稳定、准确,有望为判断新型隐球菌性脑膜炎疗效、预后提供新的依据。关键词:CAP10基因;FQ―PCR;新型隐球菌中图分类号:R446.1文献标识码:ADetectionofCAPIOgeneofCryptococcusneoformansbyreal-timeHuorescentQuantitativePCRanditspreliminary-cationLIN,DMUn一$13,12,CHENGZu-jian,eta1.(Deparm~entofLaboratoryMedicineofFujianMedicalUr&ersity,ecco shoes outlet,theFirstaf-fdiatedHospitalofFujianMedicalUniversit),Fuzhou350005,China)Abstract:ObjectiveCryptococcusneofomlansCAPIOgenedetectionwasdevelopedusingreal―timeFluorescentQuantitativePCRteclmiquewiththeobjee[iveofitspreliminaryapplicationintheehmeallaboratorydiagnosisandtherapeuticeffectjudgment.MethodsAccordingtothecollstailtsequenceoffiveserolo~caltypes(A,B,C,D,AD)ofcryptococcusneofollrlans,ghd piastre,specieprimersandprobeswered~igned.CAPIOgeneWaSamplifiedwithPCRandhgatedintoapGEM―TEasyvector.AmethodfordetectionofCAP10geneusingFQ―PCRWasestablishedafterdeterminationofthesensitivityandspec~ciwofthetestaswellasthereproducibility基金项目:1.福建省教育厅A类科技计划项目(编号:JA07086);2.应用vad1基凶mRNA评估新型隐球菌的毒力(编号:X0650045)*通讯作者
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