Wysłany: Czw 23:58, 17 Mar 2011 Temat postu: UGG España RT-PCR技术ࢷ
RT-PCR技术在肠道病毒脑膜炎暴发中的应用
后确定病原的“金标准”，但需时较长,[link widoczny dla zalogowanych]，细胞出现明显的CPE需要几天到十几天的时间，同时灵敏度较RT―PCR低，因此同样不能满足疫情处置对时间的要求。套式RT―PCR检测是一种比常规RT―PCR具有更高灵敏度同时不降低特异性的技术，从接到标本到得到结果一般仅需要6个小时。适合协助现场流行病学调查工作中疫情的初步快速确定。在本次暴发疫情调查处置过程中，我们应用该项技术检测患者的血清和脑脊液标本中肠道病毒，对疫情的早期定性起到了非常重要的作用。综合考虑各种检测技术的特点及适用范围，认为套式RT―PCR是一种适合于暴发疫情处置时快速对病原进行定性的适用技术。从现场采集的20份脑脊液和血清标本，有4份用RT―PCR扩增出肠道病毒特异性基因片段，阳性率20％。4份扩增阳性标本采样时间距发病日期最短1天，最长6天，其他标本扩增阴性。这种现象可能与患者免疫力个体差异有关，同时提示应尽早采集标本。为进一步对病毒分型，在RT―PCR检测的同时，对14份患者粪便标本进行病毒分离培养，分离出8株肠道病毒，经血清学鉴定医药论坛杂志2006年6月第27卷第ll期为柯萨奇B5型病毒。从血清和脑脊液标本中提取病毒RNA是利用TRIzol试剂，TRIzol是适用于从细胞和组织中分离总RNA的一种试剂，Invitrogen公司产品说明书推荐从血清等无细胞液体中分离病毒RNA应该使用TRIzolLS试剂。虽然事后应用某手工RNA快速提取试剂盒及TRIzol试剂进行了对比试验，发现这批标本没有出现假阴性结果,[link widoczny dla zalogowanych]，但仍然建议在允许的情况下，应该使用TRIzolLS或者其它合适的RNA快速提取试剂盒，以免影响检测结果。本次应用套式RT―PCR进行病原快速检测对疫情早期定性取得了较好的效果,[link widoczny dla zalogowanych]，同时对今后的疫情处理也带出了新的思考。本次使用的引物主要是针对肠病毒中的柯萨奇病毒B血清型，对柯萨奇A和埃克病毒只有部分血清型能够进行有效扩增，今后应用时应该注意避免漏检的情况发生,[link widoczny dla zalogowanych]。另外鼻病毒与肠道病毒基因在5’一NCR具有高度的同源性，选择引物时必须注意，以排除鼻病毒可能带来的假阳性结果。此外，临床常见的病毒性脑炎的病原除肠病毒外，还有单纯疱疹病毒(HSV)、腺病毒(ADV)、巨细胞病毒(CMV)、日本脑炎病毒(JEV)等多种，目前均已建立了相应的检测方法，但这些方法均是独立的，用于检测单一种病原。在处理突发性疫情时，虽然可以对各个病原逐一排查，但势必受到疫情处置中对检测时间的要求及标本量、工作量的限制,[link widoczny dla zalogowanych]。因此，为了提高实验室检测的效率，各实验室有必要建立突发事件快速实验室检测策略，优化检测程序。对于处于一个科或一个属的病原尽可能先以广谱PCR进行粗检，阳性者再进一步检测以分型。有条件的实验室应进行多重PCR检测技术或基因芯片等高通量检测技术研究。
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